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小鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞可用于體外藥物模型和系統(tǒng)評價
小鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞可用于體外藥物模型和系統(tǒng)評價
更新時間:2022-03-21 | 點擊率:733
小鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞
是神經(jīng)膠質(zhì)形成的主要功能細胞,膠質(zhì)細胞是在大腦從早期發(fā)育到成熟的轉(zhuǎn)變過程中產(chǎn)生的。當程序性細胞死亡,或大腦發(fā)育過程中,中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損或病理性損傷時,膠質(zhì)細胞可作為大腦中的巨噬細胞。當II類組織相容性復合物表達CD-4陽性T細胞時,膠質(zhì)細胞可以表達抗原,可以進行FC介導的巨噬細胞,并與造血細胞和巨噬細胞共享抗原。小鼠星形膠質(zhì)細胞來源于正常小鼠腦組織,經(jīng)胰蛋白酶消化制備。優(yōu)化靶細胞的生長條件,從而減少對雜細胞(如脂肪細胞、成纖維細胞等)的污染,保證質(zhì)量的穩(wěn)定性。經(jīng)過10代仍能保持原代細胞的分化狀態(tài),可用于體外藥物模型和系統(tǒng)評價。
1、首先觀察小鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)基是否有滲漏、混濁現(xiàn)象。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。由于運輸問題,會有少量貼壁細胞從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶的瓶蓋,將細胞放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-4小時,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞的相關信息,如粘附特性(粘附/懸浮)、細胞形態(tài)、使用的基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代率、換液頻率等。
4、靜置后,取出細胞培養(yǎng)瓶,記錄細胞狀態(tài);建議細胞繼代培養(yǎng)后定期拍照記錄細胞生長狀況。
5、貼壁細胞:如果細胞生長密度超過80%,可以正常傳代;如果不超過80%,則將細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基取出,留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達到80%左右,然后進行繼代培養(yǎng)操作,瓶蓋可以稍微松開。
6、細胞懸?。簩⑿∈笊窠?jīng)星形膠質(zhì)細胞培養(yǎng)瓶中的液體全部轉(zhuǎn)移到50ml無菌離心管中,1200rpm離心5min。離心后,收集上清培養(yǎng)基備用。加入5ml培養(yǎng)基吹干并重懸管底的細胞沉淀。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分裝于兩個細胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),加入培養(yǎng)基至5ml;如果細胞密度不超過80%,將細胞懸液移至原瓶中繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達到80%左右。
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