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當(dāng)前位置:首頁  >  技術(shù)文章

  • 2022

    2-21
    幾種常見的細胞污染類型及處理方法

    凡混入細胞培養(yǎng)環(huán)境中對細胞生存有害的成分和造成細胞不純的異物都應(yīng)視為細胞污染,細胞污染不能*被消除,但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴重性。本文將簡要介紹幾種常見的細胞污染類型及處理方法。常見細胞污染類型細胞細菌污染特征:大小在0.5~5μm,比動物細胞小很多。多呈球狀或桿狀,形態(tài)規(guī)則,分布均勻;增殖速度快,一般細菌污染后48~72小時爆發(fā)式增殖;營養(yǎng)消耗快,培養(yǎng)基很快變黃,變渾濁;鏡下觀察有明顯的定向運動。處理方法:輕度細菌污染可用10X雙抗清洗處理,重度細菌污染建議消殺后丟棄...

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  • 2022

    2-18
    細胞凍存與復(fù)蘇的技術(shù)原理和操作步驟

    細胞凍存與細胞復(fù)蘇,是細胞培養(yǎng)過程中的常見工作。細胞凍存,是指將細胞貯存在超低溫環(huán)境中,使細胞暫時“冬眠”的技術(shù),在需要的時候再進行復(fù)蘇。細胞復(fù)蘇,是把凍存在-80℃冰箱或液氮中的細胞快速解凍,并使細胞重新恢復(fù)生長的技術(shù)。本文將為大家介紹細胞凍存與復(fù)蘇的技術(shù)要點和操作步驟。細胞凍存篇凍存原則細胞凍存原則為“慢凍”,即讓細胞在緩慢降溫的條件下逐漸冷凍。如果直接將細胞懸液放在超低溫下快速冷凍,細胞會受到冷凍損傷而死亡。在凍存液中添加的保護劑(如DMSO、甘油)和在凍存盒中添加的異...

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  • 2022

    2-15
    細胞長得慢、傳代不易貼壁,該怎么挽救?

    各類細胞產(chǎn)品是我們做實驗研究的基礎(chǔ),一支小小的細胞,關(guān)乎我們各種實驗的成功與否,細胞的”小事情“,在實驗中都是”大事情“,如果你的細胞出現(xiàn)生長緩慢、不貼壁等情況,那你可要注意了,這就是細胞狀態(tài)不好的信號,要及時“挽救”,不然很有可能細胞就瀕臨死亡。問題一:細胞生長緩慢細胞長得慢是細胞培養(yǎng)過程中比較常見的問題,一般來說,細胞活力和濃度一直是細胞健康的標志,細胞長得慢的話,活力和濃度可能都會直線下降。造成細胞生長緩慢的主要原因及解決方法:1,新配置的培養(yǎng)基以及換了新的血清,細胞不...

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  • 2022

    2-11
    Annexin V流式檢測細胞凋亡的數(shù)據(jù)分析方法

    示例:細胞用FITC-AnnexinV/PI熒光雙染細胞凋亡檢測試劑盒檢測效果圖。Jurkat細胞用1μM喜樹堿(Camptothecin)(左)或未加藥(右)處理4h,F(xiàn)ITC-AnnexinV/PI熒光雙染細胞凋亡檢測試劑盒染色后,流式細胞儀熒光檢測。AnnexinV-FITC單陽性細胞為早期凋亡細胞,AnnexinV-FITC和PI染色雙陽性的細胞為壞死細胞或者晚期凋亡。PI單染色陽性位裸核細胞。實測數(shù)據(jù)可能會因細胞類型、細胞凋亡情況,檢測儀器等的不同而存在差異,圖中數(shù)...

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  • 2022

    2-10
    細胞傳代時間經(jīng)驗技巧

    養(yǎng)細胞的小伙伴們都知道,細胞一定要傳代,因為細胞在培養(yǎng)過程中不斷的繁殖,數(shù)量也隨之增加,然而培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶的空間有限,增殖受到抑制,所以必須將一部分細胞移至別的培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶,讓細胞有足夠生長空間。細胞傳代也不僅僅是為細胞安一個更大的“家”,更重要的,是使細胞系或細胞株進一步增殖,這樣,我們才能有足夠的細胞做各種各樣的實驗。但是,對于傳代的時間,很多小伙伴都掌握不好,因為對于不同的細胞來說,判斷能否開始傳代的標準略有不同,今天,我們就主要來聊一下,細胞傳代的時間問題。什么時候...

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  • 2022

    1-20
    如何避免胎牛血清沉淀物的產(chǎn)生

    胎牛血清中可能出現(xiàn)的沉淀物是什么?①纖維蛋白,它是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物,可以達到1-2mm,可以用肉眼觀察到。②磷酸鈣,它也是常見的一種沉淀物,通常會使血清出現(xiàn)渾濁,并且在37℃培養(yǎng)的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點,這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動,因此經(jīng)常被誤認為是微生物污染。③膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì),它們也是血清中出現(xiàn)沉淀物的常見原因。關(guān)于細胞生長,我們的試驗以及經(jīng)驗表明沉淀物不會影響細胞培養(yǎng),我們的客戶以及其它血清生產(chǎn)商也證明了這一點。那...

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  • 2022

    1-19
    細胞的凍存與復(fù)蘇

    一、程序凍存步驟(需梯度降溫)1、配置凍存液,凍存液推薦配比:55%(基礎(chǔ)培養(yǎng)基)+40%(血清)+5%(DMSO)或90%胎牛血清+10%DMSO;推薦使用Procell通用血清型程序凍存液,貨號PB180436;2、制備好的細胞懸液計數(shù),計算總細胞量;3、細胞離心后盡量吸干凈上清,離心轉(zhuǎn)速1200rpm(250g)3min;4、加入配置好的凍存液重懸,調(diào)整細胞濃度為3×106~1×107cells/mL;5、分裝入凍存管,一個凍存管分裝1~1.5毫升;6、推薦使用程序降溫...

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  • 2022

    1-7
    原代細胞的取材和分離方法

    將動物機體的各種組織從機體中取出,經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機械方法處理,分散成單細胞,置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細胞得以生存、生長和繁殖,這一過程稱原代培養(yǎng)。原代細胞培養(yǎng)的步驟一般是:取材→分離→培養(yǎng)和維持,今天我們重點介紹原代細胞的取材和分離方法。一、取材人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件,直接影響細胞的體外培養(yǎng)。取材的基本要求:①取材要注意新鮮和保鮮②應(yīng)嚴格無菌③防止機械損傷④去除無用組織和避免干燥⑤應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等⑥作...

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